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离心机是蛋白质表达的通关设备之一
更新时间:2021-03-30 作者:admin 来源:
  离心机是蛋白质表达的通关设备之一


  离心机是蛋白质表达不可或缺的。俗话说,细节决定成败,尤其是在蛋白质表达和纯化等复杂实验中。操作中的一个小错误可能会直接影响结果。


  虽然大致可以分为表达、分离和纯化三个步骤,但这个过程复杂。


  蛋白质表达前期有一系列复杂的过程,需要很长时间,不能放松警惕。


  蛋白质纯化是通关的重要一步。选择合适的纯化方法可以提高蛋白质纯化的效率,使蛋白质纯化简单方便。常用的方法有亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、疏水层析等。


  亲和层析


  亲和层析纯化是一种蛋白质纯化技术,它利用生物大分子与相应分子特异性的可逆结合。


  离子交换层析


  离子交换色谱是根据蛋白质表面的电荷数量进行蛋白质分离和纯化的技术。


  凝胶过滤色谱法


  凝胶过滤(也称为排阻色谱或分子筛)是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。


  疏水相互作用色谱


  疏水作用色谱是利用盐水体系中样品分子的疏水基团与色谱介质的疏水配体之间疏水力的差异进行分离的色谱方法。


  虽然有各种方法,但都需要用离心机分离纯化。


  以脂肪氧合酶重组蛋白的诱导为例:


  1.将含有重组脂肪氧合酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株接种在5 mL LB液体培养基(含100微克/毫升氨苄青霉素)中,并在37℃下培养过夜。


  2.按照1:50或1:100的比例稀释过夜****。一般将1毫升过夜培养物转移到100毫升LB液体培养基(含100微克/毫升氨苄青霉素)中,在37℃振荡培养至OD600=0.6-0.8(优选0.6,约需3小时)。取10微升样品进行SDS-PAGE分析。


  3.对照组不添加诱导剂,实验组添加IPTG到浓度为0.5 mmol/l,在37℃下继续培养1-3小时。


  4.以12000转/分钟离心10分钟,弃去上清液,将****存放在-20℃或-70℃的冰箱中。